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悄悄告訴你：使用ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)至關(guān)重要的四個(gè)方面

點(diǎn)擊次數(shù)：12957 發(fā)布時(shí)間：2014/3/27 10:32:39

當(dāng)您看到elisa試劑盒說明書的時(shí)候你不是也非常的驚訝，這實(shí)驗(yàn)的原理竟這么簡單。然而這實(shí)驗(yàn)的過程中的那么幾個(gè)看似平凡的操作，沒做到位的話甚至?xí)䴕Я苏麄€(gè)實(shí)驗(yàn)，您可別小看了ELISA實(shí)驗(yàn)。通過我公司技術(shù)人員的總結(jié)，上海恒遠(yuǎn)悄悄告訴你：使用ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)至關(guān)重要的四個(gè)方面。

、看似無聊實(shí)則重要的洗滌：

　　如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音。有必要的話，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

第二、關(guān)鍵的封閉：

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長封閉時(shí)間。

　　如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時(shí)間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。

　　*常用的非離子型去污劑是Tween-20（恒遠(yuǎn)生物的吐溫-20第二季度的新貨已經(jīng)上市啦，需要的來電咨詢哦！）。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用，因?yàn)楹苋菀妆幌吹簟Ｒ虼怂邢礈煲褐幸脖仨毺砑臃忾]液。請勿使用高濃度，它會(huì)降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。

　　蛋白封閉液則有所不同，是永久的。它們與開放位點(diǎn)結(jié)合并封閉，同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個(gè)問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。

第三、抗體濃度須優(yōu)化：

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過多的一抗或二抗。

第四、檢測試劑要適量：

　　切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。如果您的ELISA試劑盒不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔(dān)心，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分，并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化，相信很快就會(huì)有漂亮的結(jié)果。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司